رنگ PureBlu™ Hoechst 33342 Bio-Rad برای رنگ آمیزی هسته ای معمول در میکروسکوپ فلورسانس، کاربردهای تصویربرداری سلولی و تجزیه و تحلیل چرخه سلولی در فلوسیتومتری ایده آل است. این به عنوان یک فرم پودری کاملاً خالص و آماده برای بازسازی در دسترس است و تنها یک مرحله رقیق سازی برای به دست آوردن محلول آماده برای استفاده لازم است.

Hoechst 33342 صحافی

Hoechst 33342 یک ترکیب فلورسنت ساطع کننده آبی است که به خوبی برای رنگ آمیزی هسته ای استفاده می شود. Hoechst 33342 به غشای سلولی نفوذ می کند و به شیار کوچک توالی های dsDNA غنی از A/T متصل می شود، بنابراین ترجیحاً هسته ها را رنگ آمیزی می کند (شکل 1).

dsDNA اتصال Hoechst 33342.


عکس. 1. Hoechst 33342 (به رنگ آبی) dsDNA اتصال.

Hoechst 33342 Excitation / Emission Spectra

هنگامی که به dsDNA متصل می شود، Hoechst 33342 دارای حداکثر طول موج تحریک در محدوده فرابنفش (350 نانومتر) است و رنگ را می توان به طور بهینه در کانال آبی با حداکثر انتشار 461 نانومتر تشخیص داد (شکل 2). تغییر مشخصه گسترده استوکس بین طول موج های تحریک و انتشار برای Hoechst 33342، این رنگ را در زمانی که جداسازی طیفی خوب برای کاهش تداخل فلورسانس مورد نظر است، به عنوان یک انتخاب بهینه تبدیل می کند، به عنوان مثال، در ضد رنگ آمیزی کروماتین برای میکروسکوپ ایمونوفلورسانس.

طیف تحریک و نشر Hoechst 33342.

شکل 2. طیف تحریک و نشر Hoechst 33342. حداکثر تحریک در 350 نانومتر (آبی) و حداکثر گسیل در 461 نانومتر (قرمز).

رنگ آمیزی هسته ای PureBlu Hoechst 33342 با سلول های ثابت و غیر ثابت سازگار است. در مقایسه با DAPI ، نفوذپذیری بیشتری نسبت به غشای سلولی دست نخورده نشان می‌دهد و هنگام انجام آزمایش‌ها با نمونه‌های زنده ثابت ترجیح داده می‌شود.

PureBlu Hoechst 33342 برای تجزیه و تحلیل چرخه سلولی در آنالایزر سلولی ZE5 استفاده می شود.


شکل 3. PureBlu Hoechst 33342 برای تجزیه و تحلیل چرخه سلولی در آنالایزر سلولی ZE5 استفاده می شود.

قله های GO/G1 و G2/M توسط فاز S از هم جدا می شوند. سلول های جورکات به مدت 2 ساعت در اتانول سرد 70 درصد تثبیت شدند و سپس شستشو شدند. سپس سلول ها با Hoechst 33342 در بافر حاوی 0.1٪ Triton X-100 به مدت 30 دقیقه قبل از تجزیه و تحلیل رنگ آمیزی شدند. نمونه‌ها برای حذف دوتایی‌ها دربندی شدند.

انتخاب ترجیحی برای نمونه های ثابت نشده

از رنگ آمیزی هسته ای PureBlu Hoechst 33342 با سلول های ثابت و غیر ثابت استفاده کنید . در مقایسه با DAPI نفوذپذیری نسبت به غشای سلولی دست نخورده را افزایش می دهد و بنابراین هنگام استفاده از نمونه های ثابت ترجیح داده می شود.

مستندات مرتبط

برای تعیین زنده ماندن سلول، ما همچنین رنگ‌های رنگ‌آمیزی سلول متصل به DNA غیرقابل نفوذ غشایی Readidrop 7-AAD و Readidrop پروپیدیوم یدید را در فرمول‌های آماده برای استفاده و سنجش‌های زنده ماندن سلولی VivaFix™ در طیف وسیعی از طیف‌های تحریک و انتشار ارائه می‌کنیم. ادغام آسان در پانل های فلوسایتومتری چند رنگ.

منبع

https://www.bio-rad-antibodies.com/cell-health-nuclear-staining-cell-pureblu-hoechst-33342.html